背景介绍
酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点,是真核表达蛋白的常用系统之一,具有真核表达系统的许多有点:如培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉,蛋白翻译后能进行正确加工、修饰,合理的空间折叠,使得蛋白的可溶性得到提高,是较优的重组真核蛋白生产制备的工具。
安必奇生物具有丰富的酵母蛋白表达的经验,有多种酵母表达系统,包括毕赤酵母系统和酿酒酵母系统,成功表达出超过500多种重组蛋白。我们提供筛选酵母表达高拷贝菌株的服务,可以满足客户的多种特殊需求,利用酵母表达系统成功表达过具有二硫键蛋白及糖基化蛋白,使蛋白具有类似天然的结构和翻译后修饰,保证了蛋白的活性。
酵母表达系统对诱导时间及温度的控制,培养条件和菌株生长周期的把握要求十分严格,合适的培养条件是成功实现重组蛋白表达的关键,我们的技术人员通过整合流程,把握控制关键因素,对不同蛋白进行定制化的实验设计,成功的提高重组蛋白的表达水平。
服务优势
高生产率:分泌信号序列保证了重组蛋白的大分泌量
两种表达体系可供选择:可选择组成性表达或者诱导表达两种体系
大规模生产:高达500L的生物反应器,足以达到克级水平蛋白的生产
多种菌株和载体可供选择:我们提供包括X33、GS115、SMD1168等多种菌株和多种载体
服务项目及流程
实验流程 | 实验内容 | 交付结果 | 周期 |
密码子优化+基因合成 | 安必奇的密码子优化技术,涉及基因合成、载体构建、基因保证转录、mRNA翻译、翻译后修饰等环节。 | 优化序列 | 6-8周 |
载体构建+菌株转化 | 对构建好的重组质粒电转化/PEG诱导转化/原生质体转化进入表达菌株,安必奇生物提供多种表达载体与菌株的组合,根据不同的蛋白选择适合的菌株和载体进行实验 | 载体图谱 | |
高表达菌株鉴定筛选 | 通过PCR方法确定阳性转化株, SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。 | 检测结果 | |
蛋白表达分析鉴定 | 对挑选的单克隆菌株进行小试表达检测 | ||
蛋白表达条件的优化 | 挑选阳性克隆进行常规表达筛选,并对其中表达较好的菌株优化表达条件。对挑选出来的单克隆菌株,优化培养及诱导条件(培养基,菌体密度,甲醇浓度,诱导时间等),提高目标蛋白的表达量 | 优化结果 | |
大规模蛋白表达和纯化 | 根据选取的适合的表达条件进行大规模表达纯化 | 目的蛋白 | |
目的蛋白质检 | 利用定性或者定量分析的方法进行蛋白质鉴定 | 检测结果 | |
最终交付 | 根据客户需求,提供蛋白冻干等服务 | 目的蛋白及实验报告 |