背景介绍
哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供较接近于天然状态的翻译后修饰,能在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合,具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。由哺乳动物细胞翻译后再加工修饰产生的外源蛋白质,在活性方面高于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统,更接近于天然蛋白质。这一特性使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物,特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中的应用。安必奇建立了成熟的哺乳动物蛋白表达系统及纯化服务平台,提供哺乳动物蛋白表达系统的表达与纯化服务。
安必奇拥有专业的哺乳动物细胞蛋白表达技术团队,拥有丰富的CHO及HEK293细胞表达经验,提供多种类型的哺乳动物细胞蛋白表达,包括瞬时转染,稳定细胞系的构建等,针对不同的蛋白和项目需求,选择适合的方案进行实验,同时我们也会提供多种可选附加服务如:标签去除,内毒素去除,HPLC检测,无血清悬浮培养等,为客户提供专属的定制服务。
服务优势
表达水平:我们的载体可在哺乳动物细胞中实现重组蛋白的高表达。
可选择的多种表达系统:瞬时表达、稳定细胞株表达、营养缺陷型细胞株表达(DHFR/GS)、大规模悬浮细胞表达等。
生产规模:在优化后,我们的无血清悬浮细胞培养(HEK293和CHO)在一个月内可产生数克级蛋白。
成功率:已经成功表达多个蛋白。
服务内容和流程
实验流程 | 实验内容 | 交付结果 | 周期 |
密码子优化+基因合成 | 我们会根据CHO或者HEK293密码子的偏好性对目的序列进行密码子优化,并且针对于特定功能的motif、重复序列、GC含量以及mRNA的二级结构等综合考虑优化。 | 优化序列 | 4-8周 |
载体构建 | 安必奇拥有自主研发的表达载体,并且会在目的蛋白上添加分泌信号肽或标签,以促进目的蛋白的分泌表达易于纯化。 | 载体图谱 | |
哺乳动物细胞转染 | 我们采取瞬时转染表达的方法,短时间生产少量蛋白。同时我们也有构建稳定细胞系平台,使之长期稳定生产,瞬时转染一般在2-3周内可以表达少量的蛋白。 | ||
稳定转染细胞筛选 | 稳定转染需要长时间的进行筛选,获得细胞株,稳定高表达目的蛋白,适用于大规模生产蛋白。 | ||
重组蛋白表达评估 | 小量表达目的蛋白,对蛋白的表达量及蛋白性质进行评估 | 优化结果 | |
蛋白纯化 | 安必奇生物拥有先进的AKTA purifier系统和全套预装的离子柱、分子筛、疏水柱及亲和层析柱,会根据不同的项目选择适合的纯化方法 | 目的蛋白 | |
目的蛋白质检 | 利用定性或者定量分析的方法进行蛋白质鉴定 | 检测结果 | |
最终交付 | 根据客户需求,提供蛋白冻干等服务 | 目的蛋白及实验报告 |