TEV Protease（烟草蚀刻病毒蛋白酶）磁珠

Absolute Mag™ TEV protease磁珠是一种表面固定有TEV protease (TEVp)的磁性颗粒，主要用于融合蛋白上的标签的去除，使用后的蛋白酶磁珠可以回收重复利用。TEVp是由烟草蚀刻病毒基因组中的Nla（核包含蛋白基因）控制表达，分子量约为28 kDa，可以识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七氨基酸序列，并在谷氨酰胺（Gln）和甘氨酸（Gly）之间进行切割，如果标签和目的蛋白之间是通过该七氨基酸序列进行融合，则可以被TEVp有效切割。TEVp具有高度特异性和良好的催化活性，是目前广泛用于融合蛋白标签去除的蛋白酶。

Absolute Mag™ TEV protease磁珠，利用TEVp和链霉亲和素融合形成一种复合蛋白，然后与表面生物素包被的磁珠相混合，通过链霉亲和素和生物素的亲和作用，从而使TEVp固定到磁珠表面，形成TEVp磁珠。该磁珠不仅可以有效去除标签，而且反应后可以直接使用磁铁吸附将蛋白酶标记磁珠从混合蛋白溶液中迅速分离，而无需像传统的重组蛋白酶必须经柱纯化才能去除，极大地简化了蛋白纯化的步骤，被消化后的目的蛋白和标签混合物只需经过标签吸附柱去除标签即可得到纯化的目的蛋白。

产品特点：

• 直接通过TEVp磁珠纯化蛋白，不需要柱层析操作；

• 减少下游蛋白酶污染；

• 可以重复利用一个月；

• 适用于亲和标签的切割，蛋白质中TEV位点的鉴定，以及工程化蛋白质的活化/失活。

使用方法：

（1）向管中加入磁珠，Buffer和目标蛋白，充分混匀；
（2）30℃下，在末端旋转器上孵育6小时或过夜；
（3）孵育过后，将溶液置于磁铁上吸附5分钟后，分离出的上清液即为切割后的融合蛋白和标签的混合物；
（4）将混合物按照需要进行处理；磁珠可以用Storage Buffer (PBS buffer) 清洗3x5 min后，存放在4℃再次利用。

建议使用：

（1）每250 μl-1 ml反应体系，建议使用50-100 μl磁珠悬浮液。如果磁珠保存在4℃条件下，可以维持活性超过1个月。磁珠可以重复用于多种蛋白酶反应。
（2）向反应体系中添加终浓度为10 mM的DTT或β-ME，可以获得较佳的底物蛋白水解效果。

实验数据：

以MBP-ENLYFQS-GFP底物蛋白标签去除为例。左图为Absolute Mag™ TEV protease磁珠在4℃和30℃下裂解MBP-ENLYFQS-GFP底物蛋白的SDS-PAGE分析。在30℃下，200 μl的74.6 kDa底物蛋白（0.1 mg/mL）与50 μl TEVp磁珠孵育过夜后，被有效裂解90%。而在4℃下过夜孵育，切割效率降低为21%。右图为Absolute Mag™ TEV protease磁珠在4°C下储存一个月后进行酶活检测。SDS-PAGE凝胶显示在30℃下200 ul的74.6 kDa底物蛋白（0.1mg / mL）与50 ul TEVp磁珠孵育过夜后，依然被有效切割（90%）。