工程细胞单克隆源性验证服务 (NGS方法)

在生物技术药物领域，CHO细胞作为重组蛋白类药物的主要表达体系，因其结构功能与人类蛋白高度相似，被广泛应用于肿瘤及免疫疾病治疗药物开发。其优势在于能够高效表达外源蛋白，并且具有良好的遗传稳定性和生产性能。

当前医药行业已经形成共识：用于表达治疗性蛋白的工程细胞需要来源于同一原始细胞，原因在于工程细胞的单克隆源性是产品的质量、表达量稳定性的必要条件，因此目前工程细胞的单克隆源性在药品报批过程中被重视的程度越来越高，中国药典关于重组蛋白产品要求做了如下表述“在细胞克隆过程中，应选择单个细胞用于扩增”。国际人用药品注册技术协调会(ICH)Q5D也有表述，“对于重组产品而言，基质指含有特定目的序列的转染细胞，这些基质应该是由一个始祖细胞无性增殖而来”。2011/2012年美国食品及药品管理局(FDA)也要求“提交数据进行临床研究申请(IND)需要确保这个方法基于一个单细胞克隆衍生而来”。

工程细胞的单克隆源性是保证产品质量的重要因素之一，因此得到了越来越多的重视，药物审评机构要求报批单位采用合适的实验手段证明所用细胞的单克隆源性。常用的单克隆获取方法包括有限稀释法、ClonePix法、流式细胞荧光分选技术（FACS）等。然而，这些方法在操作效率、人工依赖性以及与生产状态的接近程度上各有优缺点。

NGS方法验证单克隆源性

北京安必奇生物科技有限公司的工程细胞单克隆源性NGS验证服务是一种强大的，高灵敏度检测及验证单克隆源性的技术。这种检测技术结合了特异性探针杂交捕获，二代测序（NGS）技术和专家级生物信息学分析，提供更快的一站式检测方案，囊括传统检测要求：

• 基因序列分析：目的基因（GOI）完整性及突变检测

• 拷贝数测定：量化基因拷贝数

• 整合位点分析：明确外源基因在宿主基因组的整合位置

• 侧翼区序列解析：验证整合位点周边基因组稳定性

• 插入/缺失检测：识别序列结构异常

图1. 工程细胞单克隆源性验证服务 (NGS方法)技术原理及流程简介

图2. 抗体插入位点及单克隆源性鉴定的多种技术方案比较

   服务优势：

• 以一种技术取代Southern、一代测序、PCR和FISH多种技术

• 通过专家级生物信息学分析完成单克隆源性及遗传稳定性监管要求

• 高检测灵敏度

• 灵活检测非完整整合的抗体序列

• 一次检测三个重要数据（抗体整合位点，拷贝数和抗体突变）

• 免去引物偏好、设计时间和分析优化

• 消除数据解读中不必要的臆测

• 稳定地提供快速可靠的结果

   服务流程

• 探针设计与合成：针对目标序列定制高特异性探针文库构建

• 文库构建：优化样本处理与测序文库制备

• 杂交捕获：靶向富集目标基因组区域

• 高通量测序：采用Illumina平台进行高深度测序

• 生物信息学分析：专家团队完成数据解读与可视化

• 项目报告：提供符合申报要求的标准化报告

   询价及订购

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