CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术,因其效率高、简便、成本低,已成为当今主流的基因编辑技术之一。工程化的CRISPR/Cas9 系统由两部分组成:具有导向功能的single guide RNA (sgRNA)和行使DNA切割功能的Cas9 核酸内切酶。当细胞内同时表达 Cas9 蛋白和 sgRNA时,Cas9蛋白结合sgRNA靶向到目的DNA序列,诱导DNA双链断裂 (DSB),引发细胞内部的DNA修复机制:(1)如果有DNA修复模板进入到细胞中,DSB依据修复模板,通过同源重组修复(HDR)途径对断裂DNA进行修复,从而实现基因敲入、替换或点突变;(2)当未提供 DNA 修复模板时,细胞会通过非同源末端连接方式(NHEJ)对断裂DNA进行修复,修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象造成移码突变,从而实现基因敲除(Knock-out)。 除了传统的SpCas9,SpCas9-HF1、SaCas9等其他版本的Cas9系统也已广泛应用于基因编辑。
安必奇有多年的稳定细胞系构建经验,可以根据您的科研需求将 Cas9核酸酶基因稳定整合到您所指定的宿主细胞基因组。
应用领域
sgRNA高通量筛选
基因编辑理想的细胞模型,包括基因敲除、基因敲入、基因诱变、基因标记等
基因功能的研究
我们的优势
拥有成熟的稳定细胞系构建平台和优秀的技术团队
灵活的细胞系构建策略:脂质体转染法、电穿孔法和病毒转导法
严格的质量控制体系:细胞系无细菌、真菌和支原体污染
分离单克隆细胞,保证单一基因背景下持续、高水平的表达Cas9蛋白
Cas9 稳定整合使sgRNA共转染或共转导更易操作
用T7 Endonuclease I对Cas9活性进行功能验证
丰富的宿主细胞类型:肝癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、胰腺癌细胞、胃癌细胞、胚胎肾细胞等
服务流程
更多服务信息,请发送邮件至info@abace-biology.com或拨打电话15001325569联系我们的工作人员,我们即刻为您解答和服务。
案例分析
案例1:HEK293T-SpCas9细胞系T7EI检测结果