1. 佐剂的定义
有些物质与抗原同时或预先注射到机体,能非特异性地增强机体对抗原的免疫应答能力,这类物质称为佐剂。使用适当的佐剂可以提高动物机体对免疫原刺激的应答能力,因此佐剂也称免疫增强剂(immunopotentiator)。佐剂能延长抗原的半衰期,降低抗原的直接毒性作用,并使抗原在免疫部位缓慢、持久释放,从而提高巨噬细胞和免疫活性细胞的作用。佐剂常与抗原共同注入动物体内,以产生预期的高效价免疫血清。
2. 佐剂的分类
(1)有机佐剂,如微生物及其代谢产物,主要是短小棒状杆菌、百日咳杆菌、分歧杆菌、脂多糖等,它们在体内可促使巨噬细胞的增殖,并进而促使T细胞增殖和B细胞的抗体生成。
(2)无机佐剂,如磷酸铝、氢氧化铝、明矾等。在抗原免疫动物前,无机佐剂与抗原混匀,便可形成大量的氢氧化铝絮状沉淀,抗原被吸附于沉淀中形成聚集状的颗粒抗原。抗原物理状态的改变有利于它在外周淋巴器官(如淋巴结、脾脏)内的滞留,也有利于巨噬细胞的吞噬,故免疫原性有所提高。
(3)合成佐剂,如PolyI:C、PolyA:U等,其作用可能与增强核苷酸激酶的活性有关。
(4)复合佐剂,如弗氏佐剂、花生油乳化佐剂、植物油、矿物油等多种。Freund(1951)将液体石蜡与羊毛脂(乳化剂)按一定比例(1:2~1:9)混合后,加入抗原研磨成油包水的乳剂,免疫动物后效果好,可产生持久的抗体。因此以研究者的名字命名为弗氏不完全佐剂(incomplete Freund’s adjuvant,IFA)。如在弗氏不完全佐剂中再加入灭活的人结核菌或卡介苗(浓度为75mg/ml),则称其为弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)。分歧杆菌的加入,诱导的免疫应答会发生质的变化,在它提高了抗原的免疫原性的同时,还改变了产生的抗体的类型并且促进迟发型超敏反应的出现或加强。
(5)其他佐剂,硝酸纤维膜和聚丙烯酰胺对于量少的抗原有用,从聚丙烯酰胺凝胶上切下含有抗原的凝胶条或经电泳转移于硝酸纤维素膜后的抗原膜可直接用于免疫动物。
目前应用广泛的是弗氏佐剂。弗氏佐剂配制后,高压灭菌,在2~8℃条件下可长期保存。注射弗氏完全佐剂后,在注射部位经常出现肉芽肿和持久的溃疡。如用于人类,不仅会对病人增加痛苦,还会诱发实验过敏性自身免疫疾病——佐剂病。所以用于人的免疫佐剂多用花生油乳化佐剂,较为安全。
3. 佐剂的生物学作用
(1)增强抗原的免疫原性;
(2)增强机体对抗原的免疫应答能力,提高抗体滴度;
(3)改变抗体产生的类型;
(4)引起或增强Ⅳ型超敏反应。
4. 佐剂增强免疫应答的机理
(1)抗原在佐剂的辅佐作用下,更易被巨噬细胞吞噬和有效加工处理及呈递。
(2)改变抗原的物理性状,使抗原在体内缓慢释放,延长抗原与免疫细胞作用时间。
(3)促进淋巴细胞增殖、分化,从而提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度。
(4)刺激单核/巨噬细胞活化,增强其处理和提呈抗原的能力。
5. 小结
佐剂是免疫学和生物制品学中的重要内容,对于改进机体的免疫应答和免疫状态以及增强免疫效应都具有重要的作用,弗氏佐剂是目前动物实验中常用的佐剂。随着实践的深入,科学家们也越来越认识到佐剂的重要性,不断地在研发更具优势的佐剂,如安必奇的Magic™佐剂 。我司有着十多年佐剂研发经验,经过长期研发攻关和实践优化,设计了用于鼠源抗体的生产的Magic™佐剂,该佐剂具有诸多优势:①能生产高滴度的抗体;②对实验动物无不良毒副作用;③节省免疫原和佐剂 - 比传统弗氏佐剂的方法免疫原用量少;④节省时间,不需要类似弗氏佐剂的复杂乳化过程,抗原和佐剂只需简单混合即可免疫动物,免疫后35天内即可达到强免疫应答;⑤不破坏抗原天然构象,易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体;⑥常温运输 ,2~8ºC保存,有效期18个月。可见,通过不断地深入研究,人们可以对佐剂进行不断优化,助力科学研究。
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