北京安必奇生物科技有限公司开发了一个基于CRISPR/Cas9的植物基因编辑平台,该平台可以帮助客户培育具有优良性状如高产、高营养、抗病虫害或耐旱性等的植物。
CRISPR/Cas9基因编辑技术具有很高的效率和特异性,其原理与原核生物用于防御病毒或其他外来DNA入侵的机制相同。其中,CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)为成簇的具规律间隔的短回文重复序列。Cas9是一种RNA引导的与CRISPR相关的DNA内切酶。sgRNA (single-guide RNA)由crRNAs和tracrRNA组成,它可以与Cas9形成复合物,通过序列互补的方式把该复合物引导到目标DNA处。随后Cas9的HNH和RuvC结构域在PAM (proospacer adjacent motifs)位点(通常为NGG)上游3bp处切割DNA,诱发DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DBS)。DBS可通过非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)或同源重组修复(homology directed repair,HDR)的方式进行修复。非同源末端连接通常会造成片段的缺失或插入,而同源重组修复不仅可以实现片段的缺失或插入,还可实现精确的特异性位点突变。由于sgRNA的设计严格遵循沃森-克里克碱基配对原则,简单但精准,因此CRISPR/Cas9已发展为一种非常有效、快捷的基因组编辑工具。
图 1.CRISPR/Cas9基因编辑示意图(仅显示基因插入)。
北京安必奇生物拥有分子生物学实验室和尖端的仪器。我们的细胞和分子生物学专家致力于为客户提供sgRNA设计和载体构建定制服务。可以根据不同的DNA修复途径提供单基因或多基因的敲除、插入、特异位点突变,甚至单核苷酸突变。公司可进行多种植物如拟南芥、水稻、小麦、苜蓿、玉米、棉花、高粱、大豆、甜菜、卷心菜、烟草、茄子、黄瓜、土豆、矮牵牛和油菜等的转基因,能够满足客户的各种需求。同时还拥有先进的CRISPR/Cpf1系统,可用于更高效、更特异的基因编辑。CRISPR/Cpf1系统具有以下几个优点:
只需要crRNA而不需要tracrRNA即可成功靶向DNA。
可粘末端切割。
可通过在PAM位点下游18-23 bp处进行切割增加DNA重复切割机会。
可识别AT丰富的PAM位点。
实验流程:
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